1. 盒內(nèi)清單：一次性看完部配件

KTP2020試劑盒分10次與50次裝，統(tǒng)一提供：

• 2 mL或10 mL dextrin resin（MBP resin，45–165 μm）

• 空重力柱（帶1 mL或5 mL篩板）

• 濃縮洗脫緩沖液（10×，含麥芽糖）

• 快速連接接頭與塞蓋

樹(shù)脂已預(yù)平衡，拆封后無(wú)需再CIP，5 min即可上樣。

2. 裂解與預(yù)處理：讓MBP標(biāo)簽充分暴露

MBP折疊緊密，高壓勻漿壓力≥800 bar做兩遍，保證>90%標(biāo)簽位于表面；0.2 μm過(guò)濾后黏度≤4 cP，防止堵塞dextrin resin。鹽濃度控制在0.15–0.5 M NaCl，避免離子交換效應(yīng)拖尾。

3. 上樣流速：手?jǐn)Q重力柱的毫米級(jí)控制

柱床高5 cm時(shí)，重力自然流速1 mL/min≈30 cm/h，最匹配MBP-dextrin結(jié)合動(dòng)力學(xué)；推注過(guò)快用拇指輕按柱口降低流速，肉眼觀察液面下降2 mm/s即為安全區(qū)，超壓風(fēng)險(xiǎn)接近零。

4. 洗脫策略：麥芽糖梯度 VS 一步高濃度

• 溫和洗脫：10 mM麥芽糖可解離80%靶蛋白，適合后續(xù)做晶體學(xué)

• 一步20 mM麥芽糖，2 CV回收率>95%，省時(shí)間

蛋白對(duì)麥芽糖敏感時(shí)，改用pH 7.0→5.0梯度，4 CV完成，載量損失<5%

5. 樹(shù)脂再生：三步法延長(zhǎng)循環(huán)壽命

1. 3 CV 0.1 M NaOH去除內(nèi)毒素與頑固蛋白

2. 5 CV純水沖洗至pH中性

3. 3 CV 20%乙醇保存

按此流程KTP2020樹(shù)脂循環(huán)50次載量仍保持85%，堿洗次數(shù)>50后顆粒完整率>92%

6. 通量升級(jí)：把重力柱搬到96孔真空板

將dextrin resin分裝至96-well過(guò)濾板（每孔100 μL），真空度-0.2 bar，同步處理96個(gè)MBP克隆，總時(shí)長(zhǎng)40 min；樹(shù)脂可回收再用兩次，單樣本成本降至0.8元，適合表達(dá)篩選。

7. 常見(jiàn)故障與現(xiàn)場(chǎng)修正

• 洗脫峰拖尾：補(bǔ)加5 mM麥芽糖再洗1 CV，回收率可拉回8%

• 樹(shù)脂變白：誤用NaOCl消毒，糊精被氧化，配基失效，需整批更換

• 背壓驟升：樣本含DNA，加終濃度5 U/mL Benzonase裂解即可