1. 先厘清需求：重組蛋白還是抗體配對(duì)？

• 趨化實(shí)驗(yàn)：優(yōu)先選無(wú)動(dòng)物源、低內(nèi)毒素重組蛋白，濃度梯度 1–100 ng/mL 即可觀測(cè)中性粒細(xì)胞遷移。

• ELISA/Luminex：需要高親和捕獲抗體與檢測(cè)抗體配對(duì)，注意與 CXCL1/2 交叉反應(yīng)率 <0.5 %。

• IHC/IF：組織切片里 CXCL3 表達(dá)弱，選高敏兔單克隆，抗原表位靠近 C 端 α 螺旋，避免 N 端易降解區(qū)。

2. 表達(dá)系統(tǒng)決定錢(qián)包厚度

• E.coli：產(chǎn)量高、成本低，售價(jià) 100 μg 約 800–1200 元；無(wú)糖基化，活性與天然差異肉眼難辨，適合體外趨化。

• HEK293：真核糖基化，血清半衰期長(zhǎng) 1.8 倍，售價(jià)翻倍；做小鼠體內(nèi)炎癥模型更穩(wěn)，預(yù)算充足再考慮。

• 無(wú)動(dòng)物源 CHO：臨床前安全性報(bào)告可直接引用，每 100 μg 報(bào)價(jià) 3000+，適合申報(bào) IND 階段。

3. 標(biāo)簽取舍：His 還是 Tag-free？

• His 標(biāo)簽：純化得率高，鎳柱一步搞定；做晶體或 NMR 需切標(biāo)簽，額外花費(fèi)凝血酶 200 U 成本。

• Tag-free：Native 序列，體內(nèi)實(shí)驗(yàn)更可信；純化步驟多 2 步，廠家會(huì)把成本轉(zhuǎn)嫁給用戶(hù)，溢價(jià) 30 %。

4. 活性單位如何對(duì)標(biāo)？

• 看 EC50 而不是廣告頁(yè)寫(xiě)的“bioactivity"。

• 用經(jīng)典 Transwell 法：中性粒細(xì)胞 5×10? / 孔，上腔 300 μL，下腔 600 μL，37 ℃ 1 h，EC50 應(yīng)在 5–15 ng/mL。

• 若廠家只寫(xiě)“active"而無(wú)數(shù)值，要求 COA（Certificate of Analysis），不提供直接淘汰。

5. 包裝規(guī)格與分裝策略

• 常規(guī) 10 μg、50 μg、100 μg 三檔。

• 做劑量響應(yīng)曲線選 10 μg×5 支獨(dú)立包裝，避免反復(fù)凍融；做動(dòng)物模型直接買(mǎi) 500 μg 大包裝，單價(jià)降 25 %。

• 自帶分裝管優(yōu)于整管，每管 20 μL 預(yù)分，減少實(shí)驗(yàn)室手套污染概率。

6. 凍干 vs 液體：運(yùn)輸溫度陷阱

• 凍干：常溫運(yùn)輸，收到后 4 ℃保存 24 個(gè)月；復(fù)溶后一次性用完最佳，剩余液體液氮速凍可再撐 2 周。

• 液體：–80 ℃干冰運(yùn)輸，運(yùn)費(fèi) 200 元起；到貨直接放–80 ℃，活性無(wú)損失，適合沒(méi)凍干設(shè)備的實(shí)驗(yàn)室。

7. 證書(shū)與批次追溯

• 要求提供 SDS-PAGE、SEC-HPLC、內(nèi)毒素、生物活性四張圖，缺一張就換供應(yīng)商。

• 批次號(hào)與庫(kù)存管身激光雕刻一致，拍照留檔；發(fā)文章時(shí)審稿人會(huì)查。

8. 售后與技術(shù)支持

• 問(wèn)清是否 24 h 內(nèi)響應(yīng)技術(shù)郵件；CXCL3 做 ELISA 出現(xiàn)高背景，廠家能遠(yuǎn)程協(xié)助優(yōu)化封閉液配方。

• 承諾活性問(wèn)題 7 天包換，來(lái)回運(yùn)費(fèi)賣(mài)方承擔(dān)，寫(xiě)進(jìn)采購(gòu)合同。

9. 價(jià)格橫向?qū)Ρ葘?shí)例

10. 下單前的最后核對(duì)清單

• [ ] 確認(rèn)序列與 UniProt P19876 一致，無(wú)額外 N 端 Met

• [ ] 內(nèi)毒素 ≤0.1 EU/μg

• [ ] 提供生物活性 EC50 具體數(shù)值與檢測(cè)方法

• [ ] 包裝支持分裝，標(biāo)簽可選

• [ ] 售后條款寫(xiě)進(jìn)合同