1. 檢測范圍與定量限

• 線性區(qū)間：15.6 – 1000 pg/mL，覆蓋健康人血清 250 pg/mL 到膿毒癥峰值 800 pg/mL

• LOD 計算：空白均值 + 2.5×SD，實測 6.8 pg/mL，比主流競品低 30 %

• 功能靈敏度：CV ≤ 10 % 的低濃度為 12 pg/mL，可作為疾病分層閾值

2. 校準(zhǔn)曲線構(gòu)建方式

• 標(biāo)準(zhǔn)品來源：重組人 ANG-2，E.coli 表達(dá)，經(jīng)過 Heparin 親和層析，純度 ≥ 97 %

• 七點定標(biāo)：雙孔復(fù)測，4-Parameter Logistic 擬合，r ≥ 0.998，回算濃度偏差 <5 %

• 校準(zhǔn)頻率：每塊板獨立做曲線，禁止套用上批參數(shù)，避免燈源老化帶來的系統(tǒng)漂移

3. 精密度與重復(fù)性

數(shù)據(jù)通過 NCCLS EP5-A2 方案驗證，可直接寫進(jìn)注冊申報資料

4. 交叉反應(yīng)矩陣

• ANG-1：5000 pg/mL 時讀數(shù) < 15 pg/mL，干擾率 0.3 %

• VEGF-A：2000 pg/mL 無信號抬升

• Tie-2 受體：可溶型 10 μg/mL 不會阻斷抗體對 ANG-2 識別

5. 樣本體積與處理

• 血清：50 μL 上樣，1:5 預(yù)稀釋，稀釋液含動物血清封閉異嗜抗體

• EDTA 血漿：與血清斜率差異 3 %，可直接共用標(biāo)準(zhǔn)曲線

• 細(xì)胞上清：高分泌細(xì)胞系 HMVEC 經(jīng) 24 h 刺激后濃度 3 – 12 ng/mL，需再稀釋 10 倍進(jìn)入線性區(qū)

6. 穩(wěn)定性驗證

• 加速老化：37 °C 7 天，標(biāo)準(zhǔn)品回收率 93 %，底物 S/N 下降 <8 %

• 凍融循環(huán)：?80 °C ? 室溫 5 次，CV 7.2 %，仍在線性允許誤差帶

• 開封后效期：2–8 °C 密封 30 天，信號值每天衰減 0.3 %，可接受

7. 儀器兼容性

• 酶標(biāo)儀波長：450 nm 主讀，630 nm 參比，帶寬 10 nm，OD 線性 0–3.0

• 自動化平臺：Tecan Fluent 腳本已內(nèi)置，加樣體積 100 μL，CV ≤ 2 %

• 微流控：適配 384 孔版，總反應(yīng)體積 50 μL，靈敏度保持相同

8. 常見問題速查

9. 參數(shù)頁引用格式

ANG-2 ELISA (Cat#XX-ANG-200) 技術(shù)手冊 V3.2，2025-03 更新，符合 CE-IVDR 附錄 I 要求