細(xì)胞身份與編號(hào)體系

• 命名：HPSC-3223-hTERT/SV40

• 內(nèi)部編號(hào)：3223 代表 2023 年 3 月建系的第 2 株，避免與早期批次混淆

• STR 指紋：D5S818=11,12；D13S317=9,11；D7S820=10,12；與 ATCC 數(shù)據(jù)庫(kù)無(wú)交叉

基因插入方式與拷貝數(shù)

• hTERT：慢病毒載體 EF1α 啟動(dòng)子，MOI=3，單拷貝整合于 5q31.1 安全港位點(diǎn)

• SV40 大 T 抗原：逆轉(zhuǎn)錄病毒載體 MSCV-LTR 啟動(dòng)子，雙拷貝整合于 19p13.3 和 20q13.2

• 插入位點(diǎn)通過(guò) Splinkerette PCR 驗(yàn)證，無(wú)鄰近抑癌基因破壞

倍增動(dòng)力學(xué)窗口

• PDT（群體倍增時(shí)間）：22–26 h（DMEM/F12+10 % FBS，37 °C，5 % CO?）

• 連續(xù)傳代極限：實(shí)測(cè) 85 代無(wú)衰老跡象，代數(shù)標(biāo)記以復(fù)蘇當(dāng)日為 P0

• 生長(zhǎng)曲線拐點(diǎn)：>P90 出現(xiàn)倍增時(shí)間延長(zhǎng) 15 %，建議啟用早期備份

表面標(biāo)志物基準(zhǔn)值

• CD90-FITC：>95 % 陽(yáng)性，MFI 5.3×10?

• CD73-PE：>98 % 陽(yáng)性，MFI 4.1×10?

• CD45-APC：<0.5 % 陽(yáng)性，確保無(wú)造血污染

• 流式檢測(cè)每 5 代復(fù)檢一次，漂移超過(guò) 5 % 即觸發(fā)品質(zhì)警報(bào)

功能性分泌譜

• IL-6：基線 120 pg/mL，LPS 刺激 24 h 后升至 4.5 ng/mL

• VEGF-A：基線 850 pg/mL，缺氧 24 h 后升至 12 ng/mL

• Collagen I：每 10? 細(xì)胞 48 h 分泌 18 μg，ELISA 定量

• 功能漂移判定：任一指標(biāo)下降 30 % 視為批次失效

核型與基因組穩(wěn)定性

• 標(biāo)準(zhǔn)核型：46,XY，30 代內(nèi)無(wú)克隆性異常

• CNV 負(fù)荷：<0.03 事件/Mb（low-pass WGS，0.5×）

• SNP 突變率：全外顯子測(cè)序 0.2/Mb，低于背景 0.5/Mb 閾值

• 每 10 代提交第三方檢測(cè)，報(bào)告公開(kāi)下載

凍存與復(fù)蘇規(guī)格

• 凍存液：90 % FBS + 10 % DMSO，細(xì)胞密度 5×10? cells/mL

• 凍存管規(guī)格：1 mL/支，含 10 % 過(guò)量細(xì)胞量補(bǔ)償復(fù)蘇損失

• 復(fù)蘇存活率：臺(tái)盼藍(lán)法 ≥90 %，24 h 貼壁率 ≥85 %

• 運(yùn)輸條件：干冰 ≥5 kg，48 h 內(nèi)溫控記錄可追溯

支原體與無(wú)菌檢測(cè)

• 支原體：熒光法 + PCR 雙檢，靈敏度 10 CFU/mL

• 細(xì)菌真菌：14 天培養(yǎng)陰性

• 內(nèi)毒素：<0.25 EU/mL，適用于后續(xù)動(dòng)物移植實(shí)驗(yàn)

配套培養(yǎng)基配方

• 基礎(chǔ)培養(yǎng)基：DMEM/F12（1:1），含 GlutaMAX

• 添加組分：10 % 批次驗(yàn)證 FBS、1 % ITS-X、1 % NEAA、55 μM β-巰基乙醇

• 抗生素：Pen-Strep 100 U/mL，常規(guī)培養(yǎng) 2 代后撤除，避免干擾外泌體實(shí)驗(yàn)

文檔與批次追溯

• 隨貨文件：STR 報(bào)告、核型圖、支原體證書(shū)、功能檢測(cè)報(bào)告

• 電子追蹤：二維碼掃描即得完整批次履歷，支持一鍵導(dǎo)入 LIMS 系統(tǒng)