一、細胞特性與功能概述

• 永生化小鼠雪旺細胞（IMS32）是一種源自成年 ICR 小鼠背根神經(jīng)節(jié)和周圍神經(jīng)組織的細胞系，具有貼壁、紡錘形生長特性。

• 這些細胞表達膠質(zhì)細胞標(biāo)記物（如 S100、GFAP、p75NTR）、參與施萬細胞發(fā)育和周圍髓鞘形成過程中的轉(zhuǎn)錄因子（如 Krox20、Oct6、PAX3 和 SOX10），以及神經(jīng)營養(yǎng)因子（如 NGF、BDNF、GDNF 和 CNTF），在周圍神經(jīng)的軸突髓鞘形成和維持、神經(jīng)損傷后的軸突再生過程中發(fā)揮關(guān)鍵作用，也參與運動和感覺神經(jīng)元的維持，可用于研究神經(jīng)再生、脫髓鞘疾病等神經(jīng)學(xué)領(lǐng)域。

二、培養(yǎng)基的配制與選擇

• 培養(yǎng)基：推薦使用 PriCoat™ T25 燒瓶或應(yīng)用細胞外基質(zhì)以促進細胞粘附，培養(yǎng)基為 PriGrow III + 10% FBS + 1% 青霉素 / 鏈霉素溶液，培養(yǎng)條件為 37℃、5% CO?。

三、細胞的復(fù)蘇與凍存

• 凍存：將細胞收集并制成單細胞懸液，加入含 5% DMSO 的凍存液中，輕輕混勻后分裝于凍存管，放入 - 80℃冰箱中預(yù)凍，24 小時后轉(zhuǎn)入液氮罐中長期保存。

• 復(fù)蘇：從液氮中取出凍存管，迅速放入 37℃水浴中快速解凍，待細胞懸液解凍后，立即轉(zhuǎn)移到含有適量預(yù)熱培養(yǎng)基的離心管中，低速離心后去除上清，用新鮮培養(yǎng)基重懸細胞并接種到培養(yǎng)瓶中進行培養(yǎng)。

四、細胞的傳代

• 當(dāng)細胞密度達到 70%-90% 匯合時，即可進行傳代。

• 傳代步驟：

1. 吸去上清液，加入 100mm 培養(yǎng)皿 10 至 12mL 培養(yǎng)基。

2. 通過反復(fù)吸打使細胞從培養(yǎng)皿表面脫落。

3. 在顯微鏡下檢查細胞是否全脫落。

4. 將細胞懸浮液收集到 50mL 離心管中。

5. 將細胞懸浮液與培養(yǎng)基按 1:3 至 1:4 的比例混合，并將其接種到新的培養(yǎng)容器中。

6. 在 37℃、5% CO? 的條件下培養(yǎng)。

五、細胞培養(yǎng)的觀察與記錄

• 肉眼觀察：主要觀察培養(yǎng)基的顏色變化及細胞生長情況。若培養(yǎng)基顏色變黃、變渾濁等，可能提示細胞狀態(tài)不佳或受到污染。

• 顯微鏡觀察：定期在倒置顯微鏡下觀察細胞的形態(tài)、生長狀態(tài)等。正常的 IMS32 細胞呈紡錘形，立體感強。

六、細胞培養(yǎng)的污染與防治

• 污染種類：常見的有細菌、酵母菌、霉菌和病毒等污染。

• 預(yù)防方法：嚴格無菌操作技術(shù)，如在超凈工作臺內(nèi)進行操作、使用無菌器械和試劑等；保持操作環(huán)境清潔；使用良好的細胞來源和培養(yǎng)基配制。

• 檢測與處理：可通過肉眼直接觀察法、培養(yǎng)檢查法、顯微鏡觀察法、PCR 檢測等方法檢測污染。一旦發(fā)現(xiàn)污染，應(yīng)及時采取相應(yīng)的處理措施，如丟棄培養(yǎng)物、使用抗生素等。